液相色譜的柱子通常分為正相柱和反相柱。正相柱大多以硅膠為柱,或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團(tuán)的鍵合相硅膠柱;反相柱填料主要以硅膠為基質(zhì),在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(tuán)(ODS)稱為C18柱,其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。
C18色譜柱的使用:
1、 新柱子在使用前需用純有機(jī)試劑(如甲醇、乙腈)低流速?zèng)_洗,沖洗體積以20倍柱體積為宜,以便固定相能充分潤(rùn)濕、碳鏈能舒展*,使色譜柱的性能達(dá)到狀態(tài);
2、 使用時(shí)需在每日實(shí)驗(yàn)結(jié)束后沖洗色譜柱,尤其是流動(dòng)相中含有酸或鹽時(shí),需將色譜柱中的酸或鹽沖洗干凈,通常建議用10%甲醇水沖洗20倍柱體積;
3、 長(zhǎng)期保存前要將色譜柱*沖洗,建議沖洗3-4小時(shí)以上,后保存在純有機(jī)試劑或高比例的有機(jī)試劑溶液(如90%甲醇水)中;
4、 日常保存溶劑(即第二天需繼續(xù)使用時(shí))盡量與3中相同;
5、 由于C18柱(極性改性處理的除外)的固定相疏水性較強(qiáng),在使用過程中盡量不要使用高水相條件,若水相比例過高,易引起固定相疏水塌陷,導(dǎo)致柱效迅速下降,甚至造成不可逆的負(fù)面影響,建議使用過程中水相比例不超過90%;
6、 色譜柱壓力升高、柱性能下降:通常為色譜柱被污染,對(duì)色譜柱進(jìn)行再生處理可恢復(fù)部分柱效;
7、 色譜柱壓力驟升,通常由鹽析出或篩板堵塞引起。若是鹽析出,用10%甲醇水低流速?zèng)_洗至壓力恢復(fù)即可;若判斷并非鹽析出,以純甲醇或10%甲醇水為流動(dòng)相反沖色譜柱(將色譜柱反接,不接檢測(cè)器),若反沖半小時(shí)仍無效果,則需尋找其他原因。